（一） 需要准备材料
平头镊子，一次性刀片，1.5ml离心管 ，450ml离心管，恒温加热水浴锅，剪尖吸头（剪尖后可以用酒精灯过火将吸头处理平滑）
（二） 原生质体转化
（1）取10μl质粒DNA于1.5ml离心管。
（2）加入100μl原生质体溶液，轻柔混匀。
（3）加入等体积（110μl）新鲜配制的即用型转化溶液D，轻柔完全混匀，室温25℃孵育5-15min，间歇轻柔混匀。
（4）加入2倍体积（440μl）溶液B，轻柔完全混匀，终止转化过程。
（5）于100×g，室温离心1-2min，吸掉上清。
（6）加入500μl溶液B轻轻重悬原生质体，于100×g，室温离心1min，吸掉上清。此步目的是为了充分去除转化液内残留组分，避免后续可能产生的负面影响。
展开剩余80%（7）将沉淀重悬于1ml溶液E中，轻柔混匀。
（三）原生质体培养和收集
（1）将离心管水平放置，于25℃弱光培养2-16h。
（2）【可选】于100×g，室温离心2min收集原生质体，去掉大部分上清。
（3）【可选】原生质体沉淀重悬于剩余溶液中，-80℃保存。
试剂信息
英文名称：Plant Protoplast Transformation Kit (PEG-Mediated)
中文名称： 植物原生质体转化试剂盒（PEG法）
状态：白色固体
核心组分：液态缓冲液（W5/WI溶液）、固态PEG混合粉末（需复溶）
溶解性： 易溶于水
纯度：≥95%
储存条件：-20℃避光干燥
生产厂商：西安强化生物科技
&作用机制PEG介导的转化机制基于物理化学协同效应，分为以下关键步骤：
（一）原生质体膜通透性改变
PEG的电荷作用：PEG分子带轻微负电荷，通过与细胞膜磷脂双分子层的极性基团形成氢键，破坏膜表面电荷平衡，导致膜脂质结构暂时紊乱，形成瞬时孔隙。
钙离子协同：试剂盒中的二价阳离子与DNA的磷酸骨架结合，中和DNA负电荷，并通过PEG的“分子桥”作用吸附于原生质体膜表面，促进DNA-膜复合物形成。
（二）DNA/大分子内吞
膜融合诱导：PEG在高浓度下引发原生质体快速收缩，同时通过电荷重排迫使质膜与DNA复合物紧密接触，触发内吞作用。
热休克辅助：部分方案结合短暂热休克，进一步增加膜流动性，加速外源物质内化。
（三）转化终止与恢复
终止液作用：加入含渗透压稳定剂的终止液，稀释PEG浓度并恢复等渗环境，防止膜结构持续损伤。
细胞修复：终止后离心洗涤，原生质体在弱光培养（23–25°C）中修复膜结构，启动外源基因表达。
&相关试剂Angiotensin (1-7)
钙螯合剂，126824-24-6
Prostaglandin B2 (PGB2)
Prostaglandin E1 (PGE1)
Fluo-3 Pentapotassium Salt Fluo-3五钾盐
Carboxy-PTIO（cPTIO）一氧化氮清除剂
MitoSOX Red Mitochondrial Superoxide Indicator
MitoTEMPOL线粒体靶向SOD模拟物，1101113-39-6
Aminoethoxyvinylglycine (AVG) Hydrochloride
Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit
Firefly Luciferase,Recombinant重组萤火虫荧光素酶
BAPTA，Tetrasodium Salt钙螯合剂，126824-24-6
EGTA AM，CalciumChelator钙螯合剂，99590-86-0
Ethidium Homodimer 1 (EthD-1)，溴乙啡锭二聚体1
S-Nitrosoglutathione(GSNO)亚硝基谷胱甘肽/NO供体
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本试剂用于科研领域，其他用途概不适用！
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